一级结构 • 肽图分析

UPLC质量肽图分析是蛋白质一级结构研究中极为重要的手段之一，不但可以比较重组与天然蛋白质结果之间的同一性，确认基因工程上游和下游处理过程中是否发生差错、重组产物中是否存在后转译化学修饰及未预期氨基酸的变异等，而且不同批次产品的肽谱比较可验证工艺过程的稳定性。因此，肽谱分析在生物医药产品质控中尤为重要。

·检测依据

  - 中国药典2020年版三部通则(3405)肽图检查法

  - 中国药典2020年版四部通则(0431)质谱法

·原理

  - 由于不同蛋白质的氨基酸序列（一级结构）不同，经酶水解后产生不同的肽段，这些肽段在反相色谱柱中的保留不同，经梯度洗脱后依次被质谱检出，从而得到具有特征的肽谱图和肽段序列。

·检测范围

  - 蛋白质样品，包括但不限于中间产物、原液、成品和稳定性样品。

·主要设备

  - 高分辨质谱仪：XevoG2-XS QTof

  - 超高效液相色谱：Acquity UPLCⅠ-Class

·样品要求

  - 总量：大于300μg

  - 状态：无色澄清液体/白色固体

  - 纯度：大于1mg/ml

·交付内容

  - 序列覆盖率

  - N/C末端序列确证

  - 质量肽图（UPLC-MS/MS）

  - 翻译后修饰分析（氧化、脱酰胺、N/O糖基化等）

  - 二硫键定位

  - 质谱法全序列