MALDI分子量分析样品是如何样品制备？ 2023-05-17 样品若是溶液样品，浓度及盐离子浓度合适，直接进行上机测试，不经处理。若是固体样品，直接溶解在20%ACN,0.1%FA,等易挥发试剂中，进行上机即可。
样品中含糖时能否进行分子量测试？ 2023-05-17 样品中是多糖位点，多种糖型时， 因为出峰较杂，规律性较差，无法进行去卷积。在MALDI-TOF的分子量测试时 ，因为含糖基之后的蛋白质在飞行管内的飞行路线会发生改变。所以导致检测分子量不准确，一般会偏小1-2万分子量。
高分辨分子量与MALDI-TOF分子量两种方法的差异？ 2023-05-17 高分辨分子量通过液质联用的方法,通过C4色谱柱的保留分离,(前10Min有 Load过程，相当于脱盐)，带电范围M/Z 400-4000，可带多电荷。误差较小。MALDI-TOF通过带一个电荷，离子化方式通过激光激发检测。两者在3000Da以下的分子量检测精度和误差上没有区别，可选择MALDI-TOF测试。对大分子，3000Da以上的可以选择高分辨，误差较小。高分辨分子量对样品要求较高，需要纯度较高，糖基化等修饰少。
同一样品N端测试与电转印之后的N端测试结果有何差异？ 2023-05-17 样品纯度未达到标准，导致直接测试时出峰较杂，无法判断。电转印+N端相当于纯化的过程，将目标部分进行测试，经过纯化的样品杂峰较少，故可以判断各个循环。
N端测试各个循环均无峰的原因分析？ 2023-05-17 样品N末端存在封闭或者发生修饰，无法进行正常反应，所以后续循环均不出峰。或者样品中蛋白质含量太低，无法进行测定。
N端测序含有非标准氨基酸的序列在图谱上怎么反映？ 2023-05-17 由于标准品是由19种天然氨基酸组成，每个循环裂解下来的氨基酸都跟标准进行比对，从而实现定性。如果样品中含有非标准氨基酸，裂解下来的峰将会和所有19种氨基酸都对不上，从而无法判断。
N端测序样品中为什么不能含有甘氨酸或其他游离氨基酸？应该怎么处理？ 2023-05-17 蛋白质样品有时候为了稳定而添加了保护剂，如果样品中添加了游离氨基酸，在测序时会造成污染。可以对样品进行透析等处理，去除干扰物。
N端测序含有多个亚基的蛋白质怎么测序？ 2023-05-17 含有多个亚基的蛋白质由于不止一个N端，在测序时会与多个含有游离a氨基结合并裂解下来，导致每个循环的图谱上出现多个峰，影响序列的判断。所以，对于含有多个亚基的蛋白质，我们通常通过还原性电泳，将不同的亚基分开，再通过电转印将不同的亚基转到PVDF膜上，分别进行N端测序。也可以将样品用还原剂还原后，通过HPLC分离各亚基，收集各亚基分别进行N端测序。
不知道理论二硫键配对方式，是否可以从实验中判断理论配对方式？ 2023-05-17 没有理论配对方式，试验结果无法进行判断是否和理论一致。
HPLC肽图检查法的实验重复性如何？能否做到样品和对照的比较？ 2023-05-17 重复性较好，能通过和标准对照品一同实验来比较一致性，主要是判断出峰数量和出峰时间的一致性。最好是样品和对照品一同酶解，一同进行液相检测。如果中间隔较长时间，且不是同一批酶解，可能会出现细小的差别。主要是酶解较难控制。
