干货分享 | 氨基酸手性分析
2024-07-01
中科新生命
984化学合成法是目前多肽药物最常用的制备方法之一，但合成工艺会导致氨基酸发生消旋，产生的差向异构体影响多肽药物的稳定性以及生物活性等。在《化学合成多肽药物药学研究技术指导原则（试行）》中明确要求对多肽药物中的差向肽杂质进行质量控制。
差向肽含有一个或者多个差向异构化的氨基酸，可能的杂质组合非常多且杂质的色谱行为与主成分非常接近，分离难度大；目前通常是将多肽水解成氨基酸，检测水解后氨基酸手性异构体的含量，判断易发生消旋的氨基酸，进一步制备相应的异构体杂质进行研究。因此手性氨基酸的分离和分析是差向肽杂质控制的关键。
中科新生命解决方案
中科新生命采用LC-MS分析氨基酸的D和L构型：
多肽药物酸水解成游离氨基酸；
水解后的氨基酸与手性衍生试剂FDLA进行衍生，从而可以在非手性色谱柱上实现D型和L型氨基酸的分离；
UHPLC-MS对衍生产物进行分析，高分辨质谱具有高分辨率和高灵敏度能准确测定氨基酸的手性构型。
氨基酸种类
实现19种天然氨基酸（甘氨酸没有手性）以及7种非标氨基酸的手性异构体的检测分析；不在清单中的非标氨基酸可以进行方法开发。
|
No. |
氨基酸 |
No. |
氨基酸 |
|
1 |
Ala |
14 |
His |
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2 |
Val |
15 |
Cys |
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3 |
Ile |
16 |
Met |
|
4 |
Leu |
17 |
Trp |
|
5 |
Ser |
18 |
Gln |
|
6 |
Tyr |
19 |
Asn |
|
7 |
Thr |
20 |
Allo-Thr |
|
8 |
Asp |
21 |
Orn |
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9 |
Glu |
22 |
Cit |
|
10 |
Pro |
23 |
Phg |
|
11 |
Phe |
24 |
Try(Bzl) |
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12 |
Lys |
25 |
4-Cl-Phe |
|
13 |
Arg |
26 |
3-(2-naphthyl)-Ala |
代表性图谱
图1.氨基酸代表性图谱
检测限
方法的检测限为0.01%。
图2. Ser检测限图谱：D-Ser/L-Ser浓度比为0.01%
服务过的药物品种
迄今为止，中科新生命已有十多种多肽药物的手性分析的项目经验，包括近两年火热的司美格鲁肽和替尔泊肽，德谷胰岛素、醋酸西曲瑞克、阿托西班、依降钙素、特利加压素等品种，具有丰富的项目经验和申报经验。
