KIDNEY INT（IF14.8）丨肾脏病顶刊！空间蛋白成像揭示ApoE蛋白有望成为C3肾小球病诊断标志物

C3GN患者12例，DDD患者12例。其中对一名DDD患者进行了间隔2年的两次MS研究。

对收集到的样本进行FFPE包埋切片，使用激光显微切割对肾小球区域进行选择，结合LC-MS/MS技术进行蛋白质的表达特征分析。

与对照组相比，我们首先观察了C3GN和DDD的补体蛋白的情况。DDD与0时间移植活检的线性倍数变化显示再C5, C6, C8, C9, C7, ApoE, 补体因子H相关(CFHR)5, C3, CFHR1, 和补体因子H (CFH)有不同程度的升高(图1a)。比较DDD和C3GN中的补体蛋白的差异情况，末端途径的补体蛋白增加了6至9倍（图1c）。有趣的是，DDD和C3GN中C3的相对丰度相似，没有显著变化。两组之间的总蛋白质倍数变化差异用火山图（图1d）和热图（图1e）进行了展示。与C3GN相比，DDD ApoE丰度增加了9倍(图1c)。其他值得注意的蛋白质包括载脂蛋白A-V、载脂蛋白A-II、体外连接蛋白均有不同程度的上调。其他补体DDD或C3GN中调节蛋白CFH、CFHR5或CFHR1的相对丰度无显著差异。热图还显示了DDD和C3GN之间补体调节蛋白的蛋白质组学概况（图 1d-e）。与C3GN相比，ApoE是DDD最稳定、最丰富的蛋白质，其次是C7、C8和C9。最后，主成分分析显示与C3GN病例相比，DDD病例的聚类更紧密(图1f)。

研究人员发现DDD病例中沿肾小球基底膜和系膜ApoE的IHC染色呈阳性（图2），鲍曼氏囊上也有染色。图2a显示沿着GBM和鲍曼氏囊的阳性ApoE染色，以及局灶性管状基底膜染色。硬化的肾小球在毛细血管中显示出强烈的ApoE染色阳性。对照组和C3GN中的ApoE IHC染色阴性。在包括微小病变疾病、IgA肾病、局灶节段性肾小球硬化、糖尿病、狼疮性肾炎和膜性肾病的对照病例中，肾小球系膜和肾小球基底膜的ApoE IHC染色也呈阴性。图2b显示了对照组和C3GN病例中沿着GBM和鲍曼氏囊的阴性ApoE染色。另外还对DDD和C3GN的ApoA-V进行了IHC染色，结果显示DDD和C3GN的ApoA-V染色很少或没有染色。

对DDD、C3GN、膜性肾病和0时间移植前肾移植活检的代表性病例进行共聚焦显微镜检查，以确认LCM/MS结果(图3)。共焦显微镜检查显示，在DDD样本中，ApoE沿GBM、鲍曼氏囊和肾小管基底膜局灶性染色明亮，但C3GN、膜性肾病和0时间植入前肾移植活检染色为阴性。图4 显示了C3GN(病例6)和DDD(病例9)的代表性病例情况。C3GN和DDD均在光学显微镜下显示增殖性肾小球肾炎，在IF显微镜下显示C3亮染色，C3GN中可见大的内膜下毛细血管壁沉积，DDD可见致密的膜内沉积，C3GN中ApoE染色阴性，但在DDD病例中IHC染色和共焦显微镜下均可见ApoE亮染色。

对31例C3G进行ApoE IHC染色。其中DDD病15例，C3GN病16例。IHC染色时尚不清楚C3GN或DDD的诊断。基于EM的DDD或C3GN诊断随后由MH确认。根据ApoE染色阳性，15例DDD病例中有12例(80%)被确诊。由于无明显ApoE染色，16例C3GN中有13例(81.3%)确诊为C3GN。根据ApoE染色和与EM结果的相关性，80.6%的病例被正确诊断为DDD病或C3GN。根据验证研究，ApoE IHC染色诊断DDD的阳性预测值为80%，阴性预测值为81.25%。