干货分享 | 二硫键检测
2024-01-16
中科新生命
1018二硫键简介
二硫键广泛存在于原核和真核生物的激素、酶、免疫球蛋白、血浆、抑制剂和毒液等蛋白质中，是重要的蛋白质翻译后修饰形式。二硫键作为共价键交联链内或链间的两个半胱氨酸，在维持多肽和蛋白质的空间立体结构及由此决定的生物活性中发挥着重要的作用。因此在蛋白质类药物的生物化学分析中，二硫键一直是关心的重点。
常规实验仪器
高分辨质谱仪：XevoG2-XS QTof (Waters)
超高效液相色谱：Acquity UPLC I-Class (Waters)
常规检测方法
在非还原条件下，对样品进行酶切后经过质谱分析，利用UNIFI软件进查库分析，确定二硫键的配对信息。主要实验方法如下：
首先根据样品的理论序列选择合适的酶对样品进行酶切，形成肽段后进行质谱分析；通过酶解后的BPI图谱可以初步判断酶解效果。
然后通过二硫键所在肽段的一级及二级质谱信息图谱，将实际测到的肽段的分子量与理论的分子量进行比对来确认二硫键的连接方式；通过二级谱图的得分、电荷态以及保留时间等限制条件能进一步提高分析结果的准确度。
部分结果展示：
下表为通过质谱分析，最终获得的二硫键配对信息表；展示的是二硫键所在肽段的酶切位点、序列、电荷态、分子量等信息。
▲二硫键分析表
▲二硫键的component plot图谱和spectra图谱
及fragmentation viewer图谱
