ddPCR技术：数字PCR法外源基因拷贝数检测
2023-09-28
中科新生命
1044
该ddPCR方法包括四个步骤：
Part.
1
液滴生成：通过液滴生成技术将样品分成约20000个油包水的液滴。
Part.
2
PCR扩增反应：在每个液滴中单独进行PCR反应。
Part.
3
液滴读取：读取每个液滴荧光值，确定阴、阳性液滴数，以得到原始样品中阳性液滴的比例。
a.内参基因
b.外源基因
▲阴、阳性液滴1D散点图
▲ FAM/HEX通道2D散点图
Part.
4
数据分析：使用泊松统计分析以确定原始样品中的目标DNA模板浓度，结果以copies/μl表示。将样品中外源基因拷贝数和样品中内参基因拷贝数换算得到外源基因在每个细胞中的拷贝数。
a.不同基因拷贝数
b.不同代次细胞基因拷贝数
▲基因拷贝数检测结果
