SECMALS检测是什么，SEC-MALS原理介绍

随着现代医药工业的发展，出现了大量的蛋白质和多肽类药物分子，而这些多肽和蛋白质分子会因为各种原因聚集成多聚体状态，影响药物的作用。因此对多肽和蛋白质分子的聚体状态和占比的检测变得十分重要。将多角度激光光散射仪（Multi-Angle Laser Light Scattering，MALS）与SEC 联用，除了可以分离出不同的集分，还可测得不同集分的分子量及其分布，因而广泛应用于高分子、生化及反应动力学等研究领域。

SEC-MALS 是WYATT 公司的多角度激光光散射检测器（DAWN HELEOS-II）和示差折光检测器（Optilab T-rEx）与高效液相色谱SEC柱联用组成的。

△DAWN HELEOS 多角度光散射仪

用于测定绝对分子量和分子尺寸

△Optilab T-rEX 示差折光仪

高灵敏度和最宽动态范围测量浓度

SEC:尺寸排阻色谱法；有时称为GPC/GFC，即凝胶渗透色谱法或凝胶过滤色谱法。

GPC/SEC是根据不同的分子具有不同的流体体积而进行分离，而不是根据分子的分子量大小。色谱柱中填充了表面具有很多小孔的填料颗粒。当样品分子随流动相一起流经填料时，尺寸较小的分子能从填料颗粒表面的孔进入其内部。而较大的颗粒只能从填料颗粒之间的间隙通过。经过一段时间，样品中含有的不同尺寸的分子由于经过的路径长短不同而实现分离。通过调整填料颗粒表面的孔径大小，可以对一定分子尺寸范围的样品进行分离。

首先通过高效液相色谱的SEC柱根据供试品不同组分的不同分子尺寸分离出不同的峰（图1），再通过激光光散射检测器利用色谱柱分离出的样品在各个角度的光散射强度测量分子的尺寸大小（图2），通过示差折光检测器测出供试品洗脱液的浓度（图3），从而计算出各个组分的绝对分子质量和占比。

△图1. 尺寸排阻色谱原理示意图

△图2. 多角度激光光散射检测原理示意图

散射光与分子量，浓度以及折射率增量的平方成正比，可用以下公式表示：

△图3. 示差折光检测原理示意图

备注：若客户可提供柱子和方法，要走特殊方法的可咨询后开展检测。

△供试品的LS 聚体信号图谱

△供试品的UV 聚体信号图谱

注：Mn为数均分子量，Mp为峰位分子量，Mw为重均分子量，Mz为Z均分子量。