常见问题

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HPLC肽图检查法,胰酶的自切峰会不会出现在肽谱图上? 2023-05-17 胰酶的使用量是蛋白质的1/50,在质谱上基本不会对蛋白质的肽段峰产生影响。
全序列检测适用多少氨基酸的小肽? 2023-05-17 适用于800-4000Da左右的小肽,太长的序列用MALDI-TOF的方法二级可能碎裂不太完全。
HPLC质量肽图,同一肽段出现不同的洗脱时间? 2023-05-17 出现不同的洗脱时间,可能由于肽段有异构化现象,分子量一样,但是极性不同,所以会出现洗脱时间有一定的差异。另外有些可能是由于肽段的丰度较高,洗脱时间过长,出现一定的拖尾现象。
是否所有蛋白质都适合质谱法C端测序? 2023-05-17 不是所有的蛋白质都能进行质谱法C端测序,首先要有理论序列。其次,有些蛋白没有合适的酶来切到合适的片段,切到的肽段太大(25个氨基酸以上)或太短(7个氨基酸以下),都不太适合质谱检测,那么找到C端肽段的机会会很小。
硫键检测不到的原因? 2023-05-17 1. 样品中的理论配对方式的可能含量很低,或者酶切之后的肽段量低于质谱检测线,所以无法被质谱检测器检测到。 2. 样品中存在理论配对方式不符的状况,无法和理论的配对方式进行匹配。 3. 质谱检测对肽段分子量大小有限制。一般M/Z比值在300-1800之间,且容易被离子化的片断才能被检测到。所以某些酶切之后肽段过小或者过大,或者肽段离子化效率很低,质谱无法进行检测。
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