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干货分享 | 生物活性检测系列二:细胞增殖抑制法

2023-12-27
中科新生命
1942

细胞增殖抑制法是一种研究生物物质活性常用的实验方法,用于研究生物物质对细胞增殖的影响。它基于生物物质与细胞表面受体的相互作用,通过激活或抑制特定的信号通路来干预细胞的增殖能力。这些信号通路可以涉及多种蛋白质的相互作用,如蛋白激酶、磷酸酶等,从而影响细胞周期的调控。通过评估生物物质对细胞增殖的影响,可以揭示其在细胞生物学和药物研究中的潜在作用机制。

 

当涉及到生物物质活性相关研究时,可以使用细胞增殖抑制法来评估不同生物活性物质对细胞的影响,如添加多种生长因子、激素、细胞因子或药物到培养的细胞中,并测量其对细胞增殖的促进或抑制效果。通过这种方法,可以确定这些物质对细胞的生理活性、调控机制以及可能的药理学应用。

 

▲细胞增殖抑制示意图

 

 

 

 

 

 

 

案例分享一

生长激素增殖活性检测

人生长激素(HGH)是一种由垂体腺分泌的多肽激素,它在人体内起着关键的调节作用。HGH由191个氨基酸残基组成,是一种大分子蛋白质。它对促进生长和细胞再生具有重要作用,同时也影响着蛋白质合成、脂肪代谢和骨骼肌肉的健康发育,常被应用于治疗生长发育异常以及一些代谢性疾病。人生长激素比活性检测使用Nb2-11细胞株,在无血清的培养条件下通过人生长激素来促进细胞增殖。利用CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay裂解细胞释放ATP,ATP的量与存在的活细胞量成正比,试剂中的荧光素酶在ATP、Mg2+、氧分子共同存在的条件下催化荧光素产生荧光,利用酶标仪检测光信号强弱进行分析。

 

 

案例分享二

胰岛素细胞活性检测

胰岛素是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素,同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。胰岛素在与胰岛素受体结合后,通过一系列的结构构象变化,激活胞内酪氨酸激酶,起始胞内信号传导,在生物体内发挥重要的生理功能。胰岛素细胞活性检测使用含有胰岛素受体的H-4-Ⅱ-E细胞,在血清含量极低的培养条件下通过胰岛素来促进细胞增殖。利用CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay裂解细胞释放ATP,ATP的量与存在的活细胞量成正比,试剂中的荧光素酶在ATP、Mg2+、氧分子共同存在的条件下催化荧光素产生荧光,利用酶标仪检测光信号强弱进行分析。

 

 

案例分享三

白介素2生物学活性检测

白细胞介素-2是一种糖蛋白,含133个氨基酸残基,是趋化因子家族的一种细胞因子。它是多细胞来源(主要由活化T细胞产生),又具有多向性作用的细胞因子(主要促进淋巴细胞生长、增殖、分化);对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用,能刺激已被特异性抗原或丝裂原启动的T细胞增殖 。在临床上,IL-2被广泛应用于癌症治疗,艾滋病治疗,自身免疫性疾病和器官移植术后的免疫抑制治疗中。白介素2生物学活性检测是使用具有IL-2依赖型的细胞株(CTLL-2)与不同浓度的PEG修饰重组人白介素2共培养,使用CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay检测共培养后的活细胞数。CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay裂解细胞释放ATP,ATP的量与存在的活细胞量成正比,试剂中的荧光素酶在ATP、Mg2+、氧分子共同存在的条件下催化荧光素产生荧光,利用酶标仪检测光信号强弱进行分析。

检测原理

通过添加刺激物或生长因子到培养的细胞中作用一段时间后,使用CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay检测共培养后的活细胞数。CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay利用一种特殊的底物与细胞内的三磷酸腺苷(ATP)发生反应,产生可检测的荧光信号。当这种底物与ATP相互作用时,会释放出荧光素酶底物,并产生强烈的荧光信号。通过荧光信号的强度,可以间接反映细胞中ATP的含量,从而评估细胞的数量和活力。

产品优势

高灵敏度:能够检测到细胞中微量的ATP含量,对于细胞活力的评估非常敏感。

操作简便:无需繁琐步骤,实验操作简便 。

无需特殊设备:只需要常见的酶标仪即可进行信号的测量,无需额外的特殊设备支持。

良好的实验重复性:稳定的试剂成分和标准化的操作流程保证了实验结果的重复性和可靠性。