抗体亲和力检测：BLI/SPR分子互作测定法
2023-06-27
中科新生命
3328近年来，利用抗体靶向病变组织或细胞表面受体，已成为理想的治疗方法。这就需要对获得的进行系统地分析鉴定，以确定抗体其在各种免疫学试验中的价值。除了对抗体的免疫球蛋白链的理化性质、结合受体的特异性、以及检测受体时的敏感度进行分析外，测定抗体对特定受体（靶蛋白）的亲和力，对选择合适的抗体用于某一特定目的十分重要。常用到的技术有Biacore表面等离子共振技术（SPR）、生物膜干涉技术（Biolayer Interferometry, BLI）。
Biacore是表面等离子共振技术（SPR），可以高灵敏度、实时、无标记的检测芯片表面活性蛋白分子的相互作用。此方法可以通过检测活性蛋白间的结合速率、解离速率测算出动力学，也可以测试蛋白分子间的结合强度。
一、表面等离子共振(SPR)原理
l 全内反射的条件下，入射光造成薄金层等离子体发生共振，导致反射光在某一特定角度（SPR角）能量低至几乎为零；
l SPR角对金膜溶液侧100-200nm范围内的折光率变化非常灵敏；
l 分子间可逆的结合/解离造成金膜附近折光率的实时变化，这一现象被Biacore实时记录。
l Biacore类似一个高精度的光学天平，通过SPR原理，能检测芯片表面是否有物质变化。
二、中科新生命Biacore仪器型号
BiacoreT200的优势
l 高灵敏度：<0.03RU/S,浓度检测限低至1pM;从离子到细胞都能测；
l 检测范围宽:KD:10-4-10-14M-1;
l 功能强大：screening，ranking，kinetics/affinity,Concentration，Immunogenicity、QC，Ligandfishing……
l 4-45℃精确控温；
l 可放置96、384板，48小时自动运行；
l 满足GxP认证；
Biacore8K的优势
l 高灵敏度：<0.02RU/s,浓度检测限低至1pM;从离子到细胞都能测；
l 检测范围宽:KD:10-3-10-14M-1;
l 8组进样针，16组样品通道，可同时平行筛选8种不同靶点;
l 超高通量检测，一天内至少可筛选2300个样品;
l 检测速度快，5小时可完成64对动力学表征。
l 4-40℃严格控温，确保通量筛选中，样品活性的稳定；
l 可同时放置4块96孔、384孔板自动运行；
l 70um的微流管路能满足绝大多数样品，可直接检测细胞上清等粗样品（建议非肿瘤细胞或粘附性低的粗样品）；
三、常规的检测方法
方法核心：芯片表面制备方式(SurfacePreparation)即将配体直接或者间接地固定在芯片表面。
1、直接偶联（未知蛋白推荐使用）
l 直接共价偶联于芯片表面
l 配体固定后不能更换、更新
l 偶联方式有：氨基偶联、表面巯基偶联、配体巯基偶联、马来酰亚胺偶联、醛基偶联
2、捕获方法（推荐抗体等带有标签分子使用）
l 使用捕获芯片或将捕获分子共价偶联于芯片表面
l 配体固定后可以更换、更新
l 捕获分子通过亲和作用固定配体
四、可检测的样品类型
l 蛋白质
l DNA/RNA
l 脂类/脂质体/生物膜（溶解性高）
l 多糖（含有氨基或巯基等基团）
l 多肽
l 小分子（含有氨基或巯基等基团）
l 全细胞/病毒/微生物（不黏附，粒径低于管路粒径）
五、部分开发产品示例
BiacoreT200
BiacoreTM8K
除SPR技术外，生物膜干涉技术（Biolayer Interferometry, BLI）也是亲和力检测的强有力手段，该技术是一种免标记技术，具有高灵敏度、高通量及样品量要求较低等优点。中科新生命采用的设备型号为ForteBio Octet，它不仅可以用于早期的研发和筛选以及晚期的临床试验，还可以用于生产监控和质量监控。如您有亲和力相关的测试服务需求，欢迎来电咨询！
