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泛素化质谱检测结果不会看怎么办?
发布日期:2017.12.01

泛素化质谱检测结果不会看怎么办?不用怕,今天的小课堂时间就来告诉你该怎么看~


泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰,修饰原理是在一系列酶的作用下,泛素的羧基末端与靶蛋白上的Lys残基的ε-氨基之间形成氨基异肽键而将泛素转移到靶蛋白上,并形成-GGR...这样的一个分支链。因为这种泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解,所以称为目前的研究热点。 通常泛素化修饰的链有以下特征(图一):


图一 泛素化修饰特征


由于翻译后修饰的蛋白质在生物样本中普遍具有含量低、动态范围广,所以如果仅通过酶切,不进行特殊处理的话,泛素化稀释被鉴定到的机会大大降低。所以一般如果通过质谱方法进行泛素化修饰鉴定时,一般推荐进行富集分析,提高泛素化的蛋白或者肽段水平。中科新生命主要应用抗体对泛素化肽段进行富集,其主要流程是首先是对泛素化的蛋白进行胰酶消化,因为胰酶的识别位点是K和R,所以在赖氨酸的修饰侧链上会产生两个甘氨酸的残基(K-GG)。利用CST公司提供的针对该残基的试剂盒对泛素化肽段进行特异性的富集。不懂的童鞋可以看如下流程如下:



富集之后的肽段就可以通过质谱进行一级二级定性,然后在查库比对时在可变修饰处添加GG的分子量偏移,就可以检测到我们心心念念的泛素化修饰啦!所以在结果中如果看到GlyGly (K)这样的标示,就表示您已经找到它啦!

得到的部分结果如下图所示:


如果您近期有检测泛素化的需求或对泛素化感兴趣,都可以联系我们。


选择我们的理由:

中科新生命采用Thermo Fisher的Q Exactive质谱平台,您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的样品寄给我们,我们会负责项目后续所有事宜,包括蛋白提取、蛋白酶切、泛素化肽段富集、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析,有了我们,检测泛素化就是如此靠谱啦!



此外,近期有一篇关于泛素化的客户文献新鲜出炉啦,近期我们也会对这篇文章进行解读,如果等不及的小伙伴们,可以在评论区或后台留下【姓名+电话+邮箱+单位】向我们索取原文哦~



   
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