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平板等电聚焦

——即平板等电聚焦技术服务

蛋白质药物等电点测试原理:两性电解质在电泳场中形成pH梯度,由于蛋白质为两性化合物,其所带的电荷与介质pH指有关,带点蛋白质在电泳中向极性相反的方向迁移,当到达其等电点时,电流达到最小,蛋白质不再移动,此处的pH值为该蛋白质样品的等电点,与标准品对比后可以进行定量计算,获取蛋白质样品的等电点参数。

“平板等电聚焦测定蛋白质的等电点,是中国药典中规定的方法”

技术指标

■  样品要求:

测试样品中尽可能无盐或低盐;样品纯度在90%以上

■  仪器设备:

MultiphorⅡ Electrophoresis System (GE Healthcare):内置陶瓷冷却板(260×200 mm)与循环水直接相连,电泳胶直接置于冷却板上,温控效果好。

EPS 3501 XL Power Supply(GE Healthcare):输出电压(0-3500V);输出电流(0-400mA);输出功率(0-200W);恒压、恒流、恒功率之间可以自动切换。

案例分析

样品名称:重组XXXXXXXX蛋白

样品批号:XXXXXXXXXXXXXX

平板等电聚焦电泳试验参数:上样量10μg

冷凝温度:9℃

电泳程序:预电泳700V 20min;500V 20min;200V 90min。

结果图片:

Q&A

1)       蛋白质的平板等电聚焦和毛细管等电聚焦方法比较。

平板等电聚焦具有分辨率高、重复性好、样品用量大、操作简便迅速等优点。而毛细管等电聚焦相对于平板等电聚焦来说具有耗时短、样品用量少、易于自动化等诸多优点,但相对设备较为昂贵,单次测试费用较高。

2)       平板等电聚焦在蛋白质类药物理化性质分析中的地位。

等电点时蛋白质最基本和重要的理化参数,而平板等电聚焦是测试蛋白质等电点的主要技术手段。由于平板等电聚焦的分辨率高、重复性好、操作简便迅速,在生物化学、分类学、分子生物学及临床医学研究等诸方面,都得到广泛应用。

   
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