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MALDI-TOF分子量

——即蛋白质(多肽)分子量的分析技术服务


基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI)其基本原理为用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量传递给生物分子,而电离过程中将质子转移到生物分子,而使生物分子电离的过程。它是一种软电离技术,适用于混合物及生物大分子的测定。MALDI-TOF-MS具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等特点,为生命科学等领域提供一种强有力的分析测试手段,并正扮演着越来越重要的作用。

“MALDI-TOF分子量分析,是蛋白质药物样品理化分析的起点之一”


技术指标

●  样品要求:

含盐量:挥发性无机盐<20mM,不挥发性无机盐<5mM;

样品蛋白质总含量>50pmol,纯度>90%;

样品应尽量保持其纯度,不要添加任何保护剂或其它物质。

●  4800 MALDI-TOF/TOF技术特性:

激光器:ND : YAG,波长355nm,频率200HZ;

检测模式:正离子和负离子模式;

离子飞行管:线性(Linear)模式=3750px,反射(Reflector)模式=7500px。

●  多肽蛋白质样品分析:

多肽样品测试分辨率可以达到18000以上,小蛋白质样品测试分辨率可以达到10000以上,大蛋白质样品测试分辨率可以达到5000以上。

案例分析

蛋白质类质谱分子量测定

(1) 样品信息:抗体样品,理论分子量为140,000Da

结果图谱:

抗体类蛋白质样品的MALDI-TOF分子量测定图谱

(2) 样品信息:PEG修饰样品,理论分子量为4300Da

结果图谱:

Q&A

1)     蛋白质类药物进行MALDI-TOF分析时会用到不同的基质。

         ■ 根据蛋白质样品分子量大小不同选择不同的基质:

         ■ Mr<10KDa,α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid (CHCA);

         ■ Mr>10KDa,Sinapinic Acid (SA);

         ■ 部分糖蛋白质样品测试选择基质为:Super DHB。

2)     比较MALDI-TOF和LC-MS(Deconvolution)测定分子量的方法。

         ■ MALDI-TOF测定蛋白质样品分子量较为简便快捷、通量高,且测试结果为单电荷无需再进行数据处理,但对于大分子量蛋白质样品,只能获取样品平均分子量。LC-MS测定分子量较为繁琐复杂、通量较低,且测试结果为多电荷,一般需去卷积处理,对于大蛋白可获取较准确分子量信息。

   
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