医药质量评估
Medical quality evaluation
联系我们

021-54975031

021-54665263

HPLC肽谱

——即肽图检查法的分析技术服务

肽图检查法是根据多肽蛋白质样品相对分子质量大小以及氨基酸组成特点,选择使用专一性较强的蛋白水解酶作用于特殊氨基酸位点,将其水解成较小片段,之后通过一定的分离检测手段形成特征性的指纹图谱。一般采用反相色谱柱根据肽段不同保留时间进行分离,得到测试样品的HPLC肽谱图。

肽图检查法是蛋白质类生物药样品在中国药典中的必做质控项目

技术指标

■  样品要求:

蛋白质浓度不低于1 μg/μl,体积不少于200 μl,并标明准确浓度;如果需要脱盐及样品浓缩的需要,需说明并标明缓冲液成分。

  HPLC的设备特性和色谱特征:

HPLC仪器:高效液相色谱仪(HPLC 1200 series, Agilent Technologies)

色谱柱:C18反相柱(Agilent, ZORBAX Eclipse XDB-C18)

检测器:紫外检测器

检测波长:214nm

色谱梯度:梯度洗脱为70分钟(A液从97%-30%,B液从3%-70%)

案例分析

  样品信息:

样品名称:XXXXXXX原料药

样品批号:XXXXXXX

  色谱条件:

流动性A液:0.1%三氟乙酸水溶液;

流动性B液:0.1%三氟乙酸乙腈溶液;

流速:1 ml/min;

梯度洗脱为70分钟(A液从97%-30%,B液从3%-70%);

检测波长:214nm;

柱温:30℃

肽图检查法的图谱实例

Q&A

1)     蛋白质类药物进行肽图检查法的必要性。

肽图检查法法对于蛋白质类药物的结构研究和特性鉴定具有重要意义,由于蛋白质类药物在重组表达过程中可能发生突变或者对目的产物进行修饰,在纯化过程中也有可能产生或带入一些与目的产物相关联的、结构相差甚微而生物活性迥异的变异体,所以必须通过肽图检查法确定蛋白质一级结构的完整性和准确性,严格保证每一批次终产物的一致性和安全性,从而有效地控制蛋白质类药物的产品质量。

2)   肽图检查法和HPLC质量肽谱的关系。

《中国药典2010》第三部附录Ⅷ E对肽图检查法进行了相应的规定,其主要手段是通过HPLC法进行肽图测定检查,结果判断时通过供试品与对照品的图谱进行比较得出结论,此法简单直观,但缺乏相应的量化指标,且有很强的主观性。

因此,APT为客户提供更好的解决方案——HPLC质量肽图,通过电喷雾离子化质谱(ESI/MS)进行肽图测定检查,既可以得到相应的色谱图谱,也可以得到各色谱峰的细节信息,且可以得到相应的肽段分子量,通过检索样品理论序列可进一步确认各色谱峰肽段对应理论序列,可同时进行定性和定量,并对样品的翻译后修饰进行鉴别,可以为蛋白类药物的质控提供更好的检测参数和结构信息确认。

   
© 2010 - 2016 上海中科新生命生物科技有限公司 版权所有 沪ICP备14033860号